溶菌酶檢測試劑盒檢測原理
產(chǎn)品簡介：
溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質(zhì)酶（muramidase）或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
以蛋清為原料，在pH6.5條件下用弱酸性陽離子交換樹脂732吸附后，再用硫酸銨洗脫，經(jīng)透析后冷凍干燥得產(chǎn)品。
測定原理：
在一定濃度的混濁菌液中，由于溶菌酶能水解細(xì)菌細(xì)胞壁上肽聚糖使細(xì)菌裂解而濃度降低，透光度增強(qiáng)，故可以根據(jù)透光度變化來推測溶菌酶的含量。
操作步驟：
1、將配制好的應(yīng)用菌液，標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液及所需檢測的樣本均放入37℃水浴箱中預(yù)溫5分鐘
以上。使菌液，標(biāo)準(zhǔn)液及檢測樣本的溫度達(dá)到37℃。
2、將可見分光光度計(jì)于530nm處,1cm光徑比色皿,以雙蒸水調(diào)透光度100 (比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)透光度100,一只用于測定)。
3、往相應(yīng)編號(hào)的試管中加入0.2ml待測樣本，取2ml應(yīng)用菌液迅速?zèng)_入試管中，立即混勻并計(jì)時(shí)。(標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液取0.2ml雙蒸水,加入2ml應(yīng)用菌液,其它操作與測定相同)
4、迅速倒入比色皿中在可見分光光度計(jì)530nm處比濁，5秒時(shí)讀取透光度值T0, 比色皿不要取出，在2 分5秒時(shí)讀取透光度值T2；
[注]：如5秒時(shí)來不及讀數(shù)，可20秒時(shí)讀取調(diào)透光度值T0,在2 分20秒時(shí)讀取透光度值T2，標(biāo)準(zhǔn)管需同樣操作。
5、求出2次透光度的差值（△T= T2-T0）。
[注]：用同一比色皿每檢測一個(gè)樣本后均要用雙蒸水沖洗干凈，才可再放第二個(gè)樣本或標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液。
優(yōu)點(diǎn)：
1、溶菌酶是很穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，有較強(qiáng)的抗熱性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的zui耐熱的酶；
2、溶菌酶不會(huì)因?yàn)橛袡C(jī)溶劑的處理而失活，當(dāng)轉(zhuǎn)移到水溶液中時(shí)，溶菌酶的活力可全部恢復(fù)；
3、溶菌酶可被冷凍或干燥處理，且活力穩(wěn)定；
4、溶菌酶適宜pH5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐；
5、溶菌酶生物試劑成本較低；
6、溶菌酶的抗菌譜較廣，不僅局限于G- 菌，對(duì)部分G+菌也有抑制效果；
7、溶菌酶作為防腐劑安全性高。溶菌酶是一種天然蛋白質(zhì)，1992年FAO/WTO 的食品添加劑協(xié)會(huì)已經(jīng)認(rèn)定溶菌酶在食品中應(yīng)用是安全的。
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