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如何操作人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒
更新時(shí)間:2017-05-13   點(diǎn)擊次數(shù):1245次

人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒基本信息

Ⅲ型膠原蛋白,PⅢP,Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶。

中文名 Ⅲ型膠原蛋白

正常值 0.6μg/ml

簡(jiǎn)    稱 PⅢP

作用酶 Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶

1979年國(guó)外已建立測(cè)定血清PⅢP的放射免疫法(RIA),并證實(shí)肝纖維化時(shí)血清PⅢP含量與肝炎癥,壞死和肝纖維化有關(guān),但以肝纖維化相關(guān)為主,因此血清PⅢP仍然是肝纖維化的重要標(biāo)記物。PⅢP對(duì)于診斷兒童肝疾病沒(méi)有意義,它隨兒童年齡的增長(zhǎng)有所升高。許多學(xué)者報(bào)道,血清PⅢP是反應(yīng)成人肝纖維化活動(dòng)的良好指標(biāo),可彌補(bǔ)肝活檢不能動(dòng)態(tài)觀察等不足。肝硬化患者明顯升高,但在肝硬化晚期,因Ⅲ型前膠原肽合成率降低,血清中PⅢP反而低于早期。PⅢP在區(qū)別慢性活動(dòng)性肝炎與慢性遷延性肝炎有良好的幫助,慢性肝PⅢP水平明顯升高,而在慢遷肝其含量與正常人無(wú)明顯差別。

人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒如何操作

    1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

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