產(chǎn)品說(shuō)明：脂質(zhì)過(guò)氧化物（lipid hydroperoxide LPO）是不飽和脂肪酸鏈經(jīng)自由基或活性氧作用后產(chǎn)生的過(guò)氧化物。病理情況下，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)可導(dǎo)致原本低含量的 LPO 升高。LPO 含量升高會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷，LPO含量與機(jī)體免疫系統(tǒng)和衰老密切相關(guān)。LPO 在酸性條件下加熱產(chǎn)生丙二醛（MDA），MDA 與硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成棕紅色物質(zhì)三甲川（3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二酮），其最大吸收波長(zhǎng)在 532nm，進(jìn)行比色后可估測(cè)樣本中 LPO 的含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
溶液的配制：1. 試劑二：臨用前取 1 瓶試劑二加入 14mL 蒸餾水，此試劑較難溶，可以 70℃加熱并劇烈振蕩以促進(jìn)溶解，或者通過(guò)超聲處理以促進(jìn)溶解。每次用前需檢查是否有粉劑析出。用不完的試劑可在 2-8℃中保存一個(gè)月。2. 標(biāo)準(zhǔn)品：為 1000nmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量）1、組織：按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1:5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。Heating MDA+ TBAH+3,5,5-Trimethyloxazolidine-2,4-dione (532 nm)H+LPOHeating2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000:1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 7s，總時(shí)間 3min），8000g 4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。3、培養(yǎng)液或其他液體：直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。
注意事項(xiàng)：1. 待測(cè)液如果有密集小氣泡，建議靜置 20min 左右等待氣泡消失再測(cè)，以免影響測(cè)定結(jié)果，如果有少量氣泡可以通過(guò)低速離心或輕磕等方式來(lái)消除。2. 待測(cè)液如果尚未澄清，可吸取上清液后再次離心。3. 為防止水浴 60min 過(guò)程中水分散失，建議使用螺旋管或用封口膜給 EP 管纏口。4. 如果用高溫助溶試劑二，需要待其冷卻至室溫后再使用。5. 如果測(cè)定吸光值過(guò)低或接近空白，適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或加大樣本量后，重新測(cè)定。如果吸光值過(guò)大或超過(guò)檢測(cè)范圍（A532＞1.5 或者 ΔA＞1.5 時(shí)），建議將樣本適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
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